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ELISA诊断技术中化学合成抗原肽的设计策略
      

一一基因工程重组抗原多采用原核表达表达的蛋白在翻译后的加工和修饰方面存在缺陷,使蛋白的生物学活性受到限制。而且在表达过程中容易一起表达原核细胞的成分,使其抗原性改变,导致交叉反应,增加了假阳性的可能性。化学合成肽由于有极高的特异性,近年来逐渐被用来作为ELISA诊断的标准抗原。但化学合成的表位肽短小和弱疏水性,使其吸附聚乙烯类介质的能力很弱尤其是缺少疏水基团侧链的表位肽当表位肽连接到聚乙烯类介质时肽的有效抗原反应位点的朝向也变得比较零乱,影响了反应的特异性和灵敏性。同时,合成抗原肽由于抗原表位少,其灵敏度会受到较大影响。针对这些问题,在设计标准抗原肽可采取以下策略:

一一1、多聚抗原肽(multiple antigen peptides,MAPs)

一一多聚抗原肽(multiple antigen peptides,MAPs)1988年由美国的Tam教授首先提出并应用的。它是一种呈放射分支状的聚合肽大分子物质由一个分支状的肽核和以共价键连接的表面活性肽组成,与传统的连接在线形串联氨基酸骨架上的肽复合体不同。MAPs通过肽核远端赖氨酸(Lysine)的ɑ、εNH2聚合同型或不同型的合成抗原肽然后再以肽核的近端吸附到不同免疫介质上,发挥靶向和信息传递作用。

一一多聚抗原肽增加了一个疏水的分枝状核心骨架使连接的表位肽的朝向具有一致性,不但增加了表位肽的吸附能力由于赖氨酸骨架的放大作用使其反应的灵敏度大大提高。

一一2、多表位组合

一一单一抗原位点作为ELISA诊断试剂中的标准抗原会影响其与抗体的亲和力,同时其肽链过于短小,在包被过程中容易造成表位无法完全呈现。因此,单一抗原位点会影响检出率导致假阴性,使特异性和敏感性下降。

一一针对此种情况,可以筛选多个有效抗原表位,分别进行合成,然后混合进行包被。也可以将多个抗原表位进行串联合成,甚至将其与多聚抗原肽策略结合。

一一3、抗原表位与大分子蛋白连接

一一有研究证实,将合成的抗原表位与大分子蛋白载体连接如BSAKLH等可以提高敏感性和特异性。

一一4、聚乙烯酶标板紫外线处理

一一聚乙烯酶标板小孔内,往往受板材、肽的氨基酸序列等因素影响,造成吸附能力较低,而且不同肽段对同一板材及同一肽段对不同板材吸附效果相差甚远。

一一紫外线照射是一种简单、快速、有效提高血清学检测敏感性的方法,而且不增加本底,使用此法,可大大减少抗原包被量,降低成本。其具体方法为将酶标板在使用前用分别用紫外线照射30分钟进行预处理。

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